İlk olarak numuneler ve kontroller ilgili test kuyularına eklenir. Daha sonra, bir enzim konjugatı (bir enzime kimyasal olarak bağlı hedef madde) eklenir. Numuneler/kontroller ve konjugat karıştırılır ve antikor bağlanma bölgeleri için rekabet ettikleri antikor kuyularına aktarılır. Numunede ne kadar çok hedef madde olursa, kuyulara bağlanan konjugat o kadar az olur.

Bir inkübasyondan sonra, bağlanmamış tüm materyalleri çıkarmak için kuyular yıkanır.

Kuyucuklara konjugat varlığında renk değiştiren bir substrat eklenir. Bir inkübasyon sırasında, kuyucuklardaki hedef maddeye karşı konjugat miktarı ile orantılı olarak mavi renk gelişir. Konjugat bağı ne kadar fazlaysa, o kadar fazla mavi renk gelişir ve bu da daha az madde bulunduğunu gösterir.

Sonuçlar, bir tarama formatında görsel olarak okunur; daha az mavi renk veya daha fazla kırmızı, daha fazla hedef madde tespit edilir. Nicel formatta, kuyucukların renk değişiminin bir mikro kuyu okuyucuda ölçülmesi ve okumaların standart bir eğriyle karşılaştırılmasıyla sonuçlar elde edilir.