Her test kiti, kitin hedef maddesine özgü antikorlara sahip antikor kaplı kuyucuklar içerir.
İlk olarak numuneler ve kontroller ilgili kuyularına eklenir. İnkübasyon sırasında hedef madde antikorlara bağlanır. Kuyucuklar, bağlanmamış tüm materyalleri çıkarmak için yıkanır.
Tüm kuyucuklara bir enzim konjugatı (bir enzime kimyasal olarak bağlı antikor) eklenir. Bir inkübasyon sırasında, konjugat zaten bağlı olan hedef maddeye bağlanarak bir "sandviç" oluşturur. Kuyularda daha fazla hedef madde, kuyularda bağlanan daha fazla konjugat.
Tüm bağlanmamış konjugatları uzaklaştırmak için kuyucuklar tekrar yıkanır.
Kuyucuklara konjugat varlığında renk değiştiren bir substrat eklenir. Bir inkübasyon sırasında kuyucuklardaki konjugat miktarı ile orantılı olarak renk gelişir. Daha fazla konjugat, daha fazla renk ve tespit edilen daha fazla hedef madde.
